Evaluation of culture media for counts of Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb 12in yoghurt after refrigerated storage / Avaliação de meios de cultura para contagem de Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb 12em iogurte após a estocagem refrigerada

The agar RCPB pH5 has been considered a good alternative for counts of Bifidobacterium in yoghurt. However, during the refrigerated storage of yoghurt it is extremely difficult to count this microorganism due to the size of the colonies, which are so small they require the aid of a stereoscope to count them. Another agar, MRS-LP, has been also recommended for counts of Bifidobacterium in the presence of yoghurt bacteria. This study evaluated the supplementation of RCPB pH5 agar with dehydrated liver extract and the salts KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O and MgSO(4)7H2O, aiming at improving the differentiation of Bifidobacterium in yoghurt after refrigerated storage, and also evaluated the selective count of Bifidobacterium in yoghurt using the agar MRS-LP. The agar MRS-LP presented the same cell recovery as non-fortified RCPB pH5 agar, used as a standard medium, thus being considered a good option for counts of Bifidobacterium in yoghurt. The fortified RCPB pH5 also presented the same recovery as the standard RCPB pH5 medium, however, the addition of dehydrated liver extract to the RCPB pH5 agar considerably increased the size of the Bifidobacterium colonies after refrigerated storage, making differentiation of the colonies much easier and reliable when compared to the standard non-fortified RPCP pH5. The addition of the salts (KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O and MgSO(4)7H2O) had no influence on the performance of the RCPB pH5 agar.

O meio RCPB pH5 tem sido considerado uma boa opção para a contagem de Bifidobacterium em iogurte. Entretanto, durante a estocagem refrigerada do iogurte é extremante difícil a contagem deste microrganismo devido ao pequeno diâmetro desenvolvido pelas colônias de Bifidobacterium neste meio, sendo que a sua contagem somente se torna possível com o auxílio de um estereoscópio. Outro meio, MRS-LP, também tem sido recomendado para a contagem de Bifidobaterium em iogurte. Este estudo avaliou a suplementação do meio RCPB pH5 com extrato de fígado desidratado e com os sais KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O e MgSO(4)7H2O, visando melhorar a diferenciação de Bifidobacterium em iogurte durante a estocagem refrigerada e também avaliou a contagem seletiva de Bifidobacterium em iogurte usando o meio MRS-LP. O meio MRS-LP apresentou a mesma recuperação de células que o meio RCPB pH5, usado como padrão, após 30 dias de estocagem refrigerada do iogurte, sendo considerado uma boa opção para a contagem de Bifidobacterium em iogurtes durante a estocagem refrigerada. O meio RCPB pH5 fortificado também apresentou a mesma recuperação de células de Bifidobacterium que o meio padrão RCPB pH5; entretanto, a adição de extrato de fígado desidratado aumentou consideravelmente o diâmetro das colônias de Bifidobacterium, tornando a diferenciação destas bastante fácil e confiável quando comparadas à sua diferenciação no meio RCPB pH5 sem a fortificação. A adição dos sais (KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O e MgSO(4)7H2O) não exerceu influência no desempenho do meio RCPB pH5.

Evaluation of culture media for counts of Bifidobacterium animalis in the presence of yoghurt bacteria

Much attention has been paid to the use of Bifidobacterium sp. in yoghurts due to their excellent therapeutic and nutritional properties. However, in order to present health properties, it is recommended that each commercial product should indicate the minimum daily amount required for it to confer health benefit(s) based on in vitro and human studies. Besides the inherent low growth of Bifidobacterium sp in milk, there is a need for a reliable method for counting Bifidobacterium sp in the presence of yoghurt bacteria. This study evaluated the use of the media M-MRS, MRS-NNLP and RCPB pH5 aimed at counting the number of Bifidobacterium animalis subesp. lactis in the presence of Streptococcus thermophilus and Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus after yoghurt fermentation. The M-MRS medium was not selective, allowing for the growth of L. delbrueckii subsp bulgaricus. MRS-NNLP medium presented a good selectivity for B. animalis Bb12 with a slight reduction in the cell count of this microrganism when compared it to the standard MRS medium in pure culture. MRS-NNLP medium was considered a good option to enumerate B. animalis Bb12 although the reduction found in pure culture due to the low difference between the counts. The medium RCPB pH5 presented differentiated growth of B. animalis Bb12 in relation to the yoghurt bacteria and a cell recovery equal to that of the standard MRS, being considered the best option to enumerate Bifidobacterium sp in the presence of yoghurt bacteria.

Tem-se dado muita atenção à utilização de Bifidobacterium sp. em iogurtes devido às suas excelentes propriedades terapêuticas e nutricionais. Entretanto, é recomendado que, baseado em testes in vitro e em humanos, cada produto comercial indique qual a quantidade mínima diária recomendada de ingestão para que se obtenha os benefícios desejados à saúde. Além da inerente dificuldade do crescimento de Bifidobacterium sp em leite, há uma necessidade de padronização de um método de contagem confiável de Bifidobacterium sp na presença das bactérias do iogurte. Este trabalho avaliou o uso dos meios M-MRS, MRS-NNLP e RCPB pH5, visando a contagem do número de células de Bifidobacterium animalis Bb12 na presença de Streptococcus thermophilus e Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus após a fermentação do iogurte. O meio M-MRS não foi seletivo, apresentando crescimento de L. delbrueckii subsp. bulgaricus. O meio MRS-NNLP apresentou boa seletividade para B. animalis Bb12, apesar de uma leve redução no número de células ter sido verificada quando comparado ao meio padrão MRS em cultura pura. O meio MRS-NNLP foi considerado uma boa opção para a contagem de B. animalis Bb12 porque a diferença encontrada entre as contagens em cultura pura foi bastante pequena. O meio RCPB pH5 apresentou crescimento diferencial de Bifidobacterium animalis Bb12 em relação às bactérias do iogurte e uma recuperação de células igual ao meio padrão MRS, sendo considerado o melhor meio de cultura deste estudo para a contagem de Bifidobacterium sp na presença das culturas do iogurte.